避开WB的一些坑！（转膜裁膜配胶tips）⚠️

之前已经出过一些关于wb的东西了，（可以在western合集里看哦，干货满满！）其实还有很多东西想和大家分享，每天都做wb，tips真的不少[偷笑R]这篇是关于转膜，裁膜，配胶的一些分享给大家。 ✅转膜（图2）： PVDF膜正反面的问题，也就是哪一面去贴合聚丙烯酰胺凝胶，虽然两面都可以，但我还是建议大家凸的那一面，这样会更贴合凝胶，转膜翻车概率降低。 ✅裁膜（图3图4） 1、裁膜的时候每个条带最好保证2个以上的marker，不要裁成面条，最后容易原图审核不过关。 2、可以用保鲜袋装膜，然后隔着保鲜膜在膜上写字✍️，留下无色印记。 3、如果不用保鲜袋，也可以直接在膜上写字，这时候一定要用圆珠笔写，可以用带颜色，不要用出墨水的笔，容易把膜弄脏。 4、写字不要写在条带位置和marker上，可以写在marer旁边；写字可以简要标明膜的序号和孵育蛋白的简称。 ⚠️5、strip条带（图5） 曝光条带以后我们经常需要strip掉原来的条带敷另一个，目前我用过比较好用的stripping buffer是图上这个，亲和生命家的，效果很好，主打的特点就是：只需要孵育10min就能剥离掉，而且不用封闭，剥离速度快，效果干净～ ✅配胶： 1、分离胶大概长度配多长？如图所示（图6，如果是小分子蛋白分离胶可以适当减短） 2、分离胶凝固后用纸巾把水或乙醇吸干，紧接着可以把胶架倒置一会儿，可把剩余的残留倒干净。（图7） 3、配胶如果一直存在漏液的情况，可以试试图上的夹子，亲测好用。（图8） 4、上层浓缩胶配完插梳子凝固之后，拔梳子可以在水下拔，随着水的流动拔梳子，这样不会拔歪。（图8） 5、一般都是1.5的梳子拔歪，如果梳子拔歪了，可以再把1.0的梳子插进去，可以使其归正。（图9） 6、胶的保存：（图10） 泡纯水里 or 用保鲜膜或者一次性薄膜手套等等东西包起来。短期保存（1-2天推荐泡水里）长期保存（1周）推荐用保鲜膜或保鲜袋沾点水包起来。泡水里长期保存存在问题：胶的厚板，薄板，中间的胶分离和裂开！