WB原始数据注意事项⚠️码住

🎃整膜不整膜的问题： 现在有些杂志社都要求wb提供整膜，也就是一个figure的所有条带必须在一张膜上，之前了解到了nature子刊，还有一些别的一区top文章并没有这个要求。 对于这个是否整膜，是否裁膜，我是这么做的： ✅1.特别好出的蛋白，很好用的抗体，我会用整膜敷n个蛋白。分为两种情况： 🎃第一种：用stripping buffer剥离蛋白，此方法用于蛋白很好出，但是位置又相差很近，无法同时孵育的情况。（个人比较少用蛋白剥离液，目前没有用到过让我觉得特别好用的，如果剥离效果不好我可能就会直接裁膜孵育。 🎃第二种：直接孵育。敷完一个曝光，不用洗，直接敷另外一个。此方法用于蛋白很好出，且位置相差较远，互不影响的情况。ps：内参和标签抗体（Flag,HA,Myc等等）可以同时孵育，配一管抗体，含内参一抗和标签一抗🏷️ 2.不好出的蛋白，裁膜孵育。 注意事项： 1.一条marker要保留完整，不要把marker一分为二当作两个marker，这样不好看清楚。 2.一个条带至少原图要保留2个marker以上，最好保留3～4条marker。 3.一个figure里的目的蛋白和内参蛋白，原始数据要一一对应，尤其是泳道的多少。 4.可以在marker旁边没有蛋白的位置做简略的标记，不影响，且很多杂志都比较喜欢这样有标记的原图。 ✅3.免疫共沉淀原图 1.被ip蛋白如果离IgG较远，不要裁掉，最好保留igG。 2.若ip A蛋白，检测B蛋白，B蛋白比较好出的话，可以一张膜孵育A和B，若不好出，可以分开孵育。 3.避免IgG过浓的情况，容易掩盖目的蛋白，尤其是距离较近的情况下。